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技術文章 / article
細胞空泡化,你遇見過嗎
2018-06-27 瀏覽次數:8322
細胞空泡化,你遇見過嗎
“細胞空泡化”在細胞培養中也是一個常見問題,它的出現原因有多種,實驗人員碰到往往會很頭疼。
公司主營業務:胎牛血清(HAKATA、HyClone、SERANA、NTC、Corning、BOVOGEN、PAA、PAN、SIGMA),無外泌體血清(SBI),ELISA試劑盒,細胞(400多種類通過STR鑒定),培養基(干粉、液體),雙抗,胰酶,CST,abcam,sigma等抗體。詳詢。
在文章中小編給大家列舉出了可能出現這種情況的原因,方便大家進行分析選擇解決的方法。
可以引起細胞空泡化出現的原因有哪些那?
1)細胞老化
原代細胞培養的過程中經常出現這樣的情況,是有些細胞處于終末分化狀態,不會再分裂,時間長了就會空泡化而死亡。
傳代細胞出現這種狀況比較少見,出現的原因一般都是因為細胞傳代次數過多,老化嚴重。
2)PH值
培養液的PH值與細胞正常所需PH值差別太大。
3)胰酶消化
胰酶消化時間過長,會導致細胞狀態受損,有時也會出現這種情況。除此之外,還有一個大家容易忽略的問題,在香港的一家科研機構表明如果消化細胞吹打時力度過大,產生太多氣泡,長期存在也會出現這種現象。
4)自噬
細胞缺乏營養導致饑餓誘導形成自噬也會形成空泡化,但是這種空泡在光學顯微鏡下是看不到的,只有在電鏡下才能觀察到。
5)細胞代謝
在細胞培養過程中,由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導致細胞代謝出現問題,內質網應激狀況下會出現細胞空泡化的情況。
6)污染
衣原體感染:一旦一些細胞出現空泡化,繼續培養,空泡范圍會擴大,即使傳代后也如此,出現這種情況,細胞基本無法挽救。后來檢測發現,此種細胞存在衣原體的感染。
支原體污染:支原體污染在不嚴重的時候細胞是沒有什么明顯癥狀的,而且也無法通過光學顯微鏡觀察到,只有在嚴重的時候會導致細胞狀態變差,出現細胞空泡化的現象,細胞膜上也會出現小黑點附著。
病毒污染:在文獻上也有說病毒污染也會導致細胞出現空泡化的情況。
遇到細胞空泡化我們應該如何解決?
1)如果是因為細胞老化的原因,可以通過復蘇代數靠前的細胞進行培養。
2)如果是培養液PH的問題,可以通過更換培養液調整到合適的PH值,再進行培養。
3)在傳代時,要選用合適濃度的胰酶和選取適當的消化時間進行消化,在操作時避免吹打太過用力出現太多氣泡。
4)要保證細胞培養所需的營養充足,可以通過增加血清濃度和在培養基中加入谷氨酰氨解決。
5)盡量使用質量好和渠道正規的胎牛血清,因為這樣的血清營養豐富且外源刺激因子少,可以有效的避免出現這類問題。
6)在細胞培養時要嚴格進行無菌操作,操作時要規范,減少污染的可能性??梢酝ㄟ^試劑盒檢測細胞是否污染,對于已經污染的細胞滅菌后直接處理,避免污染其他細胞。