原代細胞培養(yǎng)中常見的一些錯誤

原代細胞（primary culture cell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。

原代細胞如何進行培養(yǎng)？

常用的原代細胞培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng)。

分散細胞培養(yǎng)大致步驟為：將動物組織從機體中取出離散成單個細胞（常用胰蛋白酶），置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞 得以生存、生長和繁殖（注意整個過程無菌）。

組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)。

原代細胞培養(yǎng)中的常見錯誤及正確操作方法？

錯誤＃1：一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間

糾正＃1：原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養(yǎng)箱中。

錯誤＃2：解凍小瓶后直接離心原代細胞

糾正＃2：我們不建議在解凍后離心細胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復原代細胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤＃3：允許原代細胞變得過于融合

糾正＃3：當生長至100％匯合時，原代細胞可以變得衰老。記住，原代細胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95％融合時，對原代細胞進行傳代培養(yǎng)。

錯誤＃4：傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正＃4：當細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。推薦專門為原代細胞配制的胰蛋白酶中和溶液，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制劑。

錯誤＃5：原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正＃5：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化。原代細胞非常敏感，重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。

錯誤＃6：原代細胞可以無限的增殖

糾正＃6：與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型，你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。