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技術(shù)文章 / article
ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）的操作步驟
2023-03-22 瀏覽次數(shù)：776
ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）可為使用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物的免疫印跡實(shí)驗(yàn)提供明亮的信號(hào)和低皮克級(jí)檢測(cè)靈敏度。 該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性?xún)r(jià)比，滿(mǎn)足用戶(hù)的免疫印跡應(yīng)用需求。
操作步驟：
1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和Western Blot步驟。 注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
2、Western Blot最后一次洗模的同時(shí)配置發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合（注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開(kāi)，避免試劑污染）。 建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度有所降低。
3、Western Blot最后一次洗膜后，用鑷子將膜取出，用濾紙吸去多余的洗滌液（切勿接觸膜的蛋白面），然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內(nèi)。
4、根據(jù)膜的大小按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在膜上，放置1-3分鐘。
5、取膜，用濾紙吸去多余的液體，將膜放在兩篇保鮮膜中間，隨后進(jìn)行壓片檢測(cè)或化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)。
6、壓片檢測(cè)：將膜固定于X光膠片暗盒內(nèi)（注意蛋白面向上）。 暗房?jī)?nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘，顯影沖洗。
7、化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)：將膜放置到化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi)，參考儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。
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